什么是浮岛效应

导读：什么是浮岛效应 灰树花菌丝体的液态深层培养过程是怎样的?

生物浮岛技术是按照自然界自身规律,运用无土栽培技术原理,采用现代农艺与生态工程措施综合集成的水面无土种植植物技术。以人工方式把高等水生植物或改良的陆生植物无土种植到富营养化水域水面上,通过植物根系的截留、吸收、吸附作用和物种竞争相克机理、水生动物的摄食

灰树花菌丝体的液态深层培养过程是怎样的?

1.摇瓶培养液体菌种 这是液态深层生产灰树花菌丝体工艺中最基本的技术。摇瓶培养的液体菌种数量较少，可供发酵罐接种用，也可直接用于栽培生产，一般适用于扩接固体菌种（主要是栽培种），生产规模不大的菌种厂适宜采用。用摇瓶培养液体菌种，周期短，可连续多次扩大培养（不超过5次），对发菌速度、菌种质量一般无不良影响。

将培养液装入500毫升三角烧瓶内，每瓶装量为100毫升，加入10～15粒小玻璃珠或直径在0.8厘米以下的玻璃碎片，用棉塞和牛皮纸封口，121℃灭菌40分钟，取出冷却至28℃时接种。每瓶接入斜面母种数小块，使气生菌丝一面向上悬浮于液面，在24～26℃恒温下静止培养48小时。当气生菌丝延伸到培养液中时，置往复式摇床上进行振荡培养，振荡频率为80～100次/分，振幅（冲程）6～10厘米；如果用旋转式摇床，偏心距为4厘米，振荡频率为150～220转/分，因旋转速度过快，菌丝球一般较大，且菌丝球表面绒毛状菌丝少，不适于做菌种使用。因此，一般旋转式摇床的偏心距应作适当调整方可使用。摇床室温度控制在24～26℃，培养72～96小时。食用菌种类不同，摇床培养的技术参数也有区别，灰树花一般在25℃，200转/分钟，偏心距4厘米，摇瓶3～4天培养结束，培养液呈黄棕色，清澈透明，有许多菌丝小球，镜检菌丝球直径，要求在1～2毫米内。取样品离心过滤（2500转/分，15分钟），105℃烘干至恒重，称菌丝体干重，达10克/升即可。这样的菌种可再扩接于三角瓶内，每瓶接种菌液10毫升，继续扩大进行摇瓶培养，因菌丝球正处于旺盛生长状态，分散度好，能缩短摇瓶培养时间，快者2天即可终止培养。如果培养液混浊，大多是细菌污染的结果。培养液经显微镜检查合格后，方可用于生产。摇瓶培养的液体菌种，在4℃冰箱中保存20～30天，在15～20℃室温中保存5～7天，对接种成功率、产量均无不良影响。

在生产实践中，也可因陋就简利用大号玻璃瓶制备液态菌种，但要有效果较好的空气过滤装置。

2.菌丝体的三级扩大培养 一级种子罐定容35升，摇瓶种子通过装有阀门的接种管接入，按5%～7%的比例接入摇瓶种子1.5～2升，按发酵工艺培养成熟；一级种子再接入二级种子罐，定容350升，按10%接入一级种子35升，培养成熟。无论哪一级菌种罐，在接种前须先将罐体空罐消毒（135～140℃）1小时，再注入培养液实消。程序是先预热夹层至90℃，10分钟后，放蒸气进入内层升至115℃左右饱压恒温8分钟，不宜过久，以免破坏养分。然后向夹层注灌冷水降温，降至26℃即可接种。接种时，要注意开排气口，关进气口，降压至0.05兆帕。同时抽样镜检并用肉汤培养基检查培养液灭菌情况。0时，取样检查杂菌、0.D值（光密度）、初糖；12、24、36、48小时，各取样检查一次0.D值、残糖、pH。正常培养48小时后，pH降至5.0，0.D值净长0.5左右，糖耗一个单位左右，即可转接容积较大的第三级培养罐。

第三级培养罐容积10吨，一般定容7500升，培养液与消泡剂（聚环氧丙烷甘油醚）同时加入，消泡剂加入量占培养液的0.03%为2.5升。按10%接种量（2个二级种子罐接1个三级罐）接入菌种。先空消罐体（14 0℃）1小时，再实消（115～118℃）50～60分钟，然后降至25℃接种。前期培养温度25～26℃，后期26～27℃。pH控制在5.5左右，降低时则流加尿素，加量一般为培养液的0.2%。发酵前期通风量1∶05（体积/体积），中期温度上升可加大通风量至1∶1，并防止pH下降过快。接种后，叶轮转速180转/分，培养72小时后，中间每隔12小时取样测糖、氮、pH、杂菌。中途补料可增加菌丝生长速度，缩短发酵时间，增加菌体浓度。补料可分次在20小时、40小时、60小时补入，补入料量视具体情况而定。

注意控制培养时间，过早放罐菌丝体产量低，太迟则菌体老化自溶，三级罐一般培养3～4天即可。放罐标准：pH下降至5，残糖2.5左右，氨态氮不超过30毫克/毫升，菌球浓度达到1000～1500个/毫升，或经3000转/分离心10分钟，每100毫升菌泥湿重在20～25克。

液体菌种发酵要根据菌类生长要求选择不同工艺条件，灰树花一般控温25℃，罐压0.05兆帕，通气量（液体∶气体）1∶0.3～0.5，搅拌200转/分。

检查发酵液质量项目包括：纯度检查，镜检或平板培养无细菌、霉菌检出；活力检查，镜检菌球边缘菌丝分枝细密，用结晶紫染色时着色深，菌丝细胞原生质尚未出现凝集现象和空泡，培养液静止5分钟，菌泥不下沉；80%菌球直径小于1毫米。

培养液经板框压滤或连续离心分离得菌丝体，经烘干可以直接食用或作饮料、食品添加剂；也可提取灰树花胞内多糖，培养液浓缩可得胞外多糖，均可作为制备药物的原料。

含大量菌丝的培养液可代替母种用于原种生产，也可代替原种用于栽培种生产。用液体菌种扩大的菌种，发菌快，活力强，用于栽培定植快、污染率低。在大规模栽培中，菌丝体液可注接已灭过菌的栽培袋，一个5吨发酵罐，3天内便可生产3.5吨液体菌种，按5%的接种量计算，500克干料的栽培袋注入液体菌种25毫升，3.5吨液体菌种可接种70吨培养料，约14万个栽培袋。

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